Thermo Scientific™ Désoxyribonucléotidyl transférase terminale (20 U/μl)

Description

La désoxyribonucléotidyl-transférase terminale (TdT), une ADN polymérase non dépendante d’une matrice, catalyse l’ajout répétitif de désoxyribonucléotides à l’extrémité 3’-OH des oligodésoxyribonucléotides et des molécules d’ADN simple et double brin. La TdT nécessite un oligonucléotide d’au moins trois nucléotides pour servir d’amorce. Avec les matrices ARN, le rendement de la TdT est variable et dépend fortement de la structure tertiaire de l’extrémité 3’ de l’ARN accepteur et de la nature du nucléotide. D’une manière générale, le rendement avec les matrices ARN est inférieur à celui observé avec les matrices ADN.

• Introduit des nucléotides modifiés (par ex., nucléotides marqués à la fluorescéine, à la biotine ou par un groupe aminoallyl) Source : Cellules d’E. coli porteuses d’un gène cloné codant la désoxyribonucléotidyl transférase terminale de thymus de veau

• L’absence d’endodésoxyribonucléases, d’exodésoxyribonucléases, de phosphatases et de ribonucléases a été vérifiée par des tests de qualité appropriés

Source :

• Cellules d’E.coli portant un gène cloné codant la désoxynucléotidyl transférase terminale du thymus de veau

• Une unité de l’enzyme permet de catalyser l’incorporation de 1 nmol de deoxythymidylate en une fraction de polynucléotide (adsorbée sur DE-81) en 60 min à 37°C.
• L’activité enzymatique est dosée dans le mélange suivant :
• Cacodylate de potassium 200 mM (pH 7,2), CoCl₂ 1 mM, Triton X-100 0,01% (v/v), oligo(dT)₁₀ 10 μM, dTTP 1 mM et [³H]-dTTP 0,4 MBq/ml
Tampon de stockage :
• L’enzyme est fournie sous la forme suivante : acétate de potassium 100 mM (pH 6,8), 2-mercaptoéthanol 2 mM, Triton X-100 0,01 % (v/v) et glycérol 50 % (v/v)

Tampon de réaction 5X :

• Cacodylate de potassium 1 M, Tris 125 mM, Triton X-100 0,05 % (v/v), CoCl₂ 5 mM (pH 7,2 à 25°C)

Inhibition et inactivation :

• Inhibiteurs : chélateurs de métaux, ammonium, chlorure, iodure, ions de phosphate
• Inactivation thermique à 70°C pendant 10 min ou par ajout d’EDTA

Recommandées dans les cas suivants :

Production d’homopolymères et d’hétéropolymères synthétiques (1) ; extension homopolymérique à tous les types d’extrémités 3’-OH des molécules d’ADN double brin linéaire (2, 3) ; marquage des oligodésoxyribonucléotides et de l’ADN (2, 4-8) ; 5’-RACE (amplification rapide d’extrémités d’ADNc) (9) ; localisation in situ de l’apoptose (10)

Remarque :

En raison de la présence de CoCl₂, le tampon de réaction de la TdT est incompatible avec des applications ultérieures. Le CoCl₂ doit donc être éliminé du mélange de réaction à l’aide d’une colonne à centrifuger ou par extraction au phénol/chloroforme suivie d’une précipitation à l’éthanol.