Invitrogen™ Kit de détermination ATP

Description

Le kit de détermination de l’ATP est un test de luminescence très sensible conçu pour la détection quantitative des taux d’ATP dans les tests biochimiques et de viabilité des cellules. Ce kit de test de l’ATP utilise la réaction entre la luciférase de luciole recombinante et son substrat, la D-luciférine, et se base sur le besoin absolu de la luciférase en ATP pour produire de la lumière (émission maximale d’environ 560 nm à pH 7,8). Avec sa sensibilité exceptionnelle, capable de détecter aussi peu que 0,1 picomole d’ATP, ce test est bien adapté aux études cinétiques et peut être utilisé avec des luminomètres ou des lecteurs de microplaques équipés d’un mode de luminescence, tels que les lecteurs microplaques multimodes Thermo Scientific Varioskan ALF et UX.

Ce test de l’ATP luciférase comprend suffisamment de réactifs pour dix plaques à 96 puits et offre un avantage unique par rapport aux autres kits de détection de l’ATP disponibles sur le marché en fournissant les composants luciférase et luciférine séparément, ce qui permet aux chercheurs d’optimiser les conditions de réaction en fonction de leurs instruments et échantillons spécifiques.

Les caractéristiques du kit de détermination de l’ATP comprennent :

• Utilise un système basé sur la luminescence pour surveiller l’émission de lumière, permettant une quantification sensible et précise des taux d’ATP
• Présente une sensibilité exceptionnelle, capable de détecter aussi peu que 0,1 picomole de l’ATP préexistant ou de l’ATP générée dans les systèmes cinétiques
• Utilisation d’une formulation unique dans laquelle les composants de luciférase et de luciférine sont conditionnés séparément, ce qui permet aux chercheurs d’optimiser les conditions de test pour leurs échantillons et instruments spécifiques
• Comprend une réserve importante de réactifs, suffisante pour effectuer 200 tests de l’ATP en utilisant des échantillons d’un volume de 500 μl ou 1 000 tests de l’ATP en utilisant des échantillons d’un volume de 100 μl (suffisant pour dix tests sur plaque à 96 tubes)
• Facilite l’analyse quantitative des taux d’ATP dans une large gamme d’échantillons biologiques et environnementaux et de systèmes expérimentaux.
• Utilisation de la réaction de bioluminescence hautement spécifique et sensible entre la luciférine et la luciférase en présence d’ATP, fournissant une méthode fiable et reproductible pour la quantification de l’ATP
• Compatibles avec divers luminomètres et lecteurs de microplaques avec un mode de luminescence, ce qui en fait un outil polyvalent pour la détection de l’ATP dans divers contextes de recherche

Principe de la réaction bioluminescente dépendante de l’ATP

Le kit de détermination de l’ATP est basé sur le besoin absolu en luciférase pour que l’ATP produise de la lumière. En présence de Mg²⁺, l’enzyme luciférase catalyse la réaction de la luciférine, de l’ATP et de l’O₂ pour former de l’oxyluciférine, de l’AAM, du CO₂, du pyrophosphate et de la lumière avec une émission d’environ 560 nm à un pH de 7,8. Le signal luminescent généré est directement proportionnel à la quantité d’ATP, ce qui permet de mesurer les taux d’ATP.

Mesurer les taux d’ATP en solution ou en lysats cellulaires

Les réactifs pour le test contenus dans le kit de détermination de l’ATP ne sont pas capable de pénétrer dans les cellules vivantes et intactes, ce qui rend ce test approprié pour mesurer l’ATP extracellulaire ou l’ATP à partir d’échantillons en solution. Pour mesurer les taux d’ATP intracellulaires pour les analyses de santé ou de viabilité des cellules, une lyse cellulaire est nécessaire pour libérer l’ATP des cellules. Les options de tampon de lyse compatibles avec la réaction luciférase-luciférine comprennent le tampon de lyse cellulaire Pierce luciférase (2X) (réf. catalogue 16189) et la formulation de tampon de lyse cellulaire 20X énumérée ci-dessous. Le tampon 20X doit être dilué à 1:20 avec de l’eau et utilisé immédiatement pour la lyse cellulaire avant d’effectuer le test de l’ATP luciférase.

Tampon de lyse 20X :

• 200 mM de Tris (pH 7,5)
• 2 M de NaCl
• 20 mM d’EDTA
• 0,2 % de Triton X-100

Kit de test de l’ATP complet et polyvalent

L’ATP est une molécule essentielle présente dans toutes les cellules vivantes et la source d’énergie pour divers processus biologiques, notamment la contraction musculaire, la propagation de l’impulsion nerveuse et la synthèse biochimique. Les taux d’ATP sont souvent mesurés pour déterminer la viabilité et le métabolisme cellulaires, évaluer la fonction et l’activité des mitochondries ou détecter une contamination bactérienne et microbienne. Ce kit de détection de l’ATP à base de luciférase est une méthode polyvalente et sensible pour mesurer la production d’ATP dans diverses réactions enzymatiques, y compris l’ATPase et la NADPH oxydase, et pour surveiller la libération d’ATP par les cellules.

Le test de luminescence luciférine–luciférase peut être utilisé pour détecter une contamination bactérienne de bas niveau dans des échantillons biologiques tels que le sang, le lait et l’urine, ainsi que des échantillons environnementaux pour les analyses de l’eau, du sol et de la boue. Le test de détection de l’ATP a également été utilisé pour étudier les effets des antibiotiques sur les populations bactériennes, pour déterminer la prolifération cellulaire et la cytotoxicité dans les cellules bactériennes et les cellules de mammifères, et pour distinguer le risque cytostatique par rapport au risque cytocide des médicaments contre le cancer sur la croissance de cellules malignes.

Order Info

Conditions d’expédition : Glace humide