Invitrogen™ Click-iT™ TUNEL Alexa Fluor Imaging Assays for Microscopy & HCS

Description

Analysez facilement et efficacement les cellules apoptotiques en seulement deux heures grâce aux dosages d’imagerie Click-iT TUNEL Alexa Fluor 488, 594 et 647. Conçus pour une utilisation avec la microscopie et l’analyse à haute densité (HCS), ces kits de dosage TUNEL utilisent une réaction catalysée par le cuivre pour détecter les dUTP modifiés par les alcynes incorporés sur les extrémités terminales d’ADN de l’ADN fragmenté. Par rapport aux dosages utilisant d’autres nucléotides modifiés, ces kits de détection d’apoptose sont rapides (réalisation en deux heures) et peuvent détecter un pourcentage plus élevé de cellules apoptotiques dans des conditions identiques. Les dosages Click-iT TUNEL permettent également le multiplexage avec des méthodes de détection de biomarqueurs de surface et intracellulaires, y compris celles qui mesurent le signal fluorescent des GFP ou des RFP.

L’apoptose est marquée par des processus cellulaires définis, notamment l’arrondi cellulaire, le blebbing et la fragmentation de l’ADN. Le dosage TUNEL est la méthode analytique la plus utilisée pour détecter l’ADN fragmenté dans les cellules apoptotiques des échantillons de tissus, en commençant par l’incorporation de dUTP modifiés aux extrémités 3’-OH de l’ADN fragmenté. Les dUTP comprennent souvent une molécule de fluorophore. En raison de la taille du fluorophore, les dUTP modifié peuvent afficher des taux d’incorporation inférieurs aux prévisions, ce qui peut nuire à la sensibilité du dosage TUNEL. Bien souvent, les fluorophores utilisés dans les kits de dosage TUNEL actuellement disponibles présentent des problèmes de photoblanchiment et de chevauchement spectral fluorescent, qui réduisent tous deux la sensibilité et la capacité de multiplexer ces dosages.

Le dosage Click-iT Plus TUNEL a été conçu pour résoudre ces problèmes et se base sur une réaction catalysée par le cuivre (I) (c.-à-d., une réaction-clic) entre un azide et un alcyne. La petite taille de l’azide Alexa Fluor, dont le poids moléculaire est d’environ 1 kDa, facilite l’incorporation du colorant Alexa Fluor 488, 594 ou 647 dans des échantillons complexes, par rapport aux anticorps plus grands (poids moléculaires ˜100 000 Da). Ceci permet une fixation légère ou une perméabilisation et une durée de traitement plus rapide des dosages (environ deux heures) et facilite la détection d’un pourcentage plus élevé de cellules apoptotiques dans des conditions identiques. Grâce à ses conditions de réaction douces, le dosage Click-iT Plus TUNEL peut également être multiplexé avec des protéines ou des colorants fluorescents.

Les dosages d’imagerie Click-iT TUNEL Alexa Fluor contiennent tous les composants nécessaires pour détecter avec précision et fiabilité l’apoptose dans les cellules adhérentes cultivées sur des lamelles ou des microplaques à 96 puits, et ils incluent également la DNase I pour générer des cassures de brins pour le contrôle positif.